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Las reacciones se realizaron en un termociclador automático de ADN MasterCycler® ep Gradient (Eppendorf, Hamburgo, Alemania). Los productos de las reacciones de amplificación se visualizaron mediante electroforesis en un gel de agarosa al 1,5% (PCR-1) y al 1% (PCR-2) que contenía bromuro de etidio (10 mg/ml) ejecutado a 115 V durante 30 minutos para la primera PCR y a 90 V durante 30 minutos para la segunda PCR. Las muestras negativas se sometieron a la amplificación del gen de mantenimiento de la casa gliceraldehído-3-fosfato deshidrogenasa (GAPDH) para evaluar la calidad de la extracción (presencia y ausencia de factores de inhibición del ADN) en una sola ronda de PCR, tal como describen Birkenheuer et al. [28]. Los cebadores y el protocolo empleado en este ensayo de PCR se muestran en la Tabla 1.
Se encontraron signos clínicos de enfermedad y/o anomalías de laboratorio en 380 de los 542 (70,1%) gatos de los que se disponía de estos datos. Se registraron signos clínicos generales en el 33% (179/542); el 31,2% (169/542) tenían signos gastrointestinales; el 23,3% (126/542) tenían signos cardiovasculares/respiratorios; el 22,7% (123/542) tenían signos renales; el 9,6% (52/542) tenían signos oculares; el 7 De los 644 gatos muestreados, se amplificó el ADN de Hepatozoon spp. en 10 animales (1,6%). La secuenciación confirmó la infección por H. felis en 9 gatos (99-100% de identidad con el GenBank KC138534.1 en 8 gatos y 100% con HQ020489.1 y 99% con KC138534.1 en 1 gato). Se confirmó la infección por Hepatozoon canis en otro gato, con un 99% de identidad con diferentes secuencias cercanas del GenBank, incluyendo aislados de garrapatas de Palestina (KT587790.1) y Pakistán (JX441117. 1), de perros de Israel (KC138535.1), India (JN584477.1) y España (AY461378.2), de cánidos salvajes de Israel (KJ868815.1), India (HQ829447.1) y España (AY731062.1) y de gatos de Israel (KC138532.2 y KC138531.2).